【实验原理】
本试剂盒依据双抗原夹心酶联免疫分析法原理,首先将待测样本加入微孔板中,样本中的未知抗体与固相抗原结合,经洗涤后形成稳固的未知抗体-抗原复合物,再加入标记抗原使其与抗原复合物结合,形成标记抗原-抗体-抗原复合物,经洗涤后加入显色剂并终止反应,测得吸光度 OD 值。
【操作步骤】
1. 加待检测样本:在相应微孔中分别加入 100 微升的阴性、阳性对照品和待测标本,对照品的瓶塞应盖在原有对应的瓶口上,切勿混用。
2. 孵育:用封口贴密封已加样的微孔板,使用微量振荡器或手工方式,震动 30 秒。将已密封的微孔板放置于水浴箱 37◦C 中孵育反应 24 小时。
3. 洗涤:孵育完毕后,揭开封口贴弃尽微孔内液体,加入 220~300 微升稀释好的洗涤液,清洗微孔板 3~5 次。洗涤结束后用吸水纸拍干微孔壁内残余的液体,并将微孔板外部的液体与指纹擦拭干净。
4. 加酶标记抗体:在微孔中加入酶标记抗原 100 微升。
5. 孵育:用封口贴密封已加样的微孔板,使用微量振荡器或手工方式,震动 30 秒。将已密封的微孔板放置于水浴箱 37◦C 中孵育反应 2 小时。
6. 洗涤:孵育完毕后,揭开封口贴弃尽微孔内液体,加入 220~300 微升稀释好的洗涤液,清洗微孔板 3~5 次。洗涤结束后用吸水纸拍干微孔壁内残余的液体,并将微孔板外部的液体与指纹擦拭干净。
7. 显色:将清洗后的微孔板平置于操作台上,每孔加入 50 微升的显色剂 A,再加入 50 微升的显色剂 B(或预先按照 1∶1 比例混匀后加入 100 微升/孔),混匀后,置于避光环境中,室温 18~25◦C 静置 20 分钟。
8. 终止:将微孔板从避光环境中取出,每孔加入 50 微升的终止液,轻微混匀。
9. 测量:将已终止反应的微孔板置于酶标仪读数槽内,使用检测波长 450nm 测量读取各孔的吸光度值(也可以使用双波长 450nm 和 630nm 测定),数据读取应在 30 分钟内完成。