激活 T 细胞的信号通路
T 淋巴细胞活化是免疫应答的基础，作为免疫应答起始的 T 淋巴细胞活化主要由双信号控制。第一信号为特异性抗原识别信号，由抗原呈递细胞 APC 表面的 MHC-抗原肽复合物和 TCR-CD3 复合物结合形成 MHC-TCR-CD3 复合体后传导信号到胞内，介导下游信号通路的激活，比如钙调蛋白、MAPK、NF-κB 等信号通路的激活。这些信号通路协同作用引起 T 细胞增殖、迁移、细胞因子生产和效应功能等，使 T 细胞由静止状态转为增殖和活化状态（图 1 右）[1]。
T 淋巴细胞活化所需要的第二信号则是共刺激信号，CD28 是 T 细胞上关键的共刺激信号受体之一，为 T 细胞提供增强 MHC-TCR 的主激活信号的主要辅助信号。CD28 的配体是 CD80 （B7 / BB1 或 B7-1）和 CD86（B7-2），与 CD28 结合后共同刺激已经被 TCR-CD3 复合体传递的信号激活的 T 细胞，使其增殖并分泌相关的白细胞介素 IL-2，IL-4 和 IL-10 等细胞因子并上调 Bcl-xL 的表达，Bcl-xL 是一种防止细胞凋亡的蛋白质 [2]。通过与 CD3 信号协同作用可以显著增强 T 细胞的扩增与活化。
T 细胞体外培养
T 细胞的体外激活（activation）与扩增（expansion）需要持续和充分的活化，通过逆转录病毒载体转导 CAR cDNA 也需要 T 细胞活化来转录与翻译。如上所述 T 细胞活化需要通过 T 细胞受体（TCR-CD3）的主要特异性信号（信号 1）和共刺激信号（如 CD28，4-1BB 或 OX40（信号 2）共同作用 [3]。以活化方式来区分，可分为基于细胞的 T 细胞活化和基于抗体的 T 细胞活化。
基于细胞的 T 细胞活化需要抗原呈递细胞如树突状细胞（DC）或人工抗原呈递细胞（AAPCs），但 DC 细胞的稳定性因人而异，进行 AAPCs 的生产和选择需要额外的资源。而抗 CD3/CD28 单克隆抗体通过靶向 CD3/CD28 分子胞外结构起到激活 T 细胞的作用，因此可以利用抗 CD3 的抗体提供第一信号，抗 CD28 抗体提供共刺激信号，来活化和扩增 T 细胞。目前体外 T-细胞的激活与扩增的主流选择还是基于相关刺激信号分子的抗体（抗 CD3/28 抗体或抗 CD3/28 抗体包被磁珠）进行 T 细胞活化（图 2 ）[4]。
AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28
AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28(Cat.No. AC68969) 是均匀的聚苯乙/烯球形珠子，已被制成可磁化和超顺磁性，这意味着它们仅在磁场中具有磁性。由于这种特性，当磁场被移除时，磁珠可以很容易地重新悬浮。例如，将靶标特异性抗体附着到磁珠表面，可以直接从复杂的悬浮液（如血液）中捕获和分离完整的细胞。这一切都可以在简单磁场的影响下完成的，而无需离心或色谱柱分离技术。通常，涂有特异性抗体的磁珠可用于分离或去除各种细胞类型。可以根据起始样品的性质、细胞表面标志物和相关下游应用进行阳性或阴性细胞分离。此外，通过将磁珠与针对细胞表面活化分子的抗体偶联，磁珠还可用于细胞的分离和扩增。AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 磁珠偶联 anti-human CD3 和 anti-human CD28 抗体，可以进行 T 细胞的分选、富集和活化，非常实用。
图 3.AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 (Cat. No. AC68969) 分选和激活 T 细胞示意图
AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 磁珠性能
我们生产的 AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 (Cat.No.AC68969) 具有非常优秀性能，能极大地简化离体 T 细胞分选活化过程。使用 AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 (磁珠: 细胞比例为 3:1) 分离并激活来自健康供体的 PBMC 的 CD3+T 细胞，分选效率非常高。
图 4. AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 （货号 # AC68969）从 PBMCs 中分选 CD3+ T 细胞分选效率
图 5. 使用 AcnoviaBeads Human T-Activator CD3/CD28 （货号 # AC68969）活化纯化的人 CD3+T 细胞培养 48 小时。使用 anti-human CD25-APC 和 anti-human CD69-PE 对细胞进行荧光染色，并通过流式细胞术进行分析。
图 6. AcnoviaBeads human T-Acivator CD3/CD28（货号 # AC68969）刺激纯化的 CD3+T 细胞，在补充有 300IU/mL IL-2 的 T 细胞培养基中细胞增殖 (左) 和细胞活率效果 (右)。
