41. Bio-rad 凝胶成像分析系统使用心得

2019-11-04 11:59 来源:丁香园 作者:
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记得刚来转化实验室的时候做的第一个实验就是跑 western blot,所以最先接触的仪器就是 bio-rad 的电泳转膜体系及 bio-rad 凝胶成像分析系统。在我们这栋实验大楼里有两台 bio-rad 凝胶成像分析系统(图一和图二),这也是我近两年的实验室工作中使用的最多的仪器(另一个使用最多的就是 bio-rad 的电泳转膜体系),它们成了我工作中最亲密的合作伙伴了,对于它在 western blot 的 PVDF 膜的曝光脾性上我进行过一段时间的摸索。


其中最深的感触在于 bio-rad 凝胶成像分析系统对曝光液的敏感度上。刚开始一段时间做 WB 的 PVDF 膜曝光的时候总是会发现同一张 PVDF 膜同一时间曝光,前后两次结果不太一致,即第一次曝光的条带之间的差异比第二次的更明显(图三),这大大的勾起了我的好奇之心,从那次以后我每次曝光的时候就会留意一下,然后慢慢的寻找原因。开始我怀疑是不是曝光时 PVDF 膜所放置的位置没有在曝光中心导致的差异,因此我每次都会注意把 PVDF 膜放在中心位置,但是仍然会出现在 PVDF 膜曝光结果跟理论不符。我再次怀疑是不是因为我们曝光时总是会在工作台上放一张 PE 手套导致的曝光的差异,然而当我把工作台的 PE 膜抽掉时发现在 PVDF 膜上加的显色液会流到它的周围,导致 PVDF 膜很快即干掉了,曝光结果更难看了,这一推断立马被我否决了。由此,我猜想同一张膜曝光结果的差异还是与 PVDF 膜上的显色液的均匀度相关呢?我总结出在曝光过程中能影响 PVDF 膜上的显色液的均匀度的因素不外乎两个原因,一是工作台上的手套不平,有褶皱;二是 PVDF 膜上的显色液加的不够多。在后面的多几次的 PVDF 膜曝光观察中发现只要注意以上两点,曝光出来的图片都与理论比较相符合。在此之后我的 PVDF 膜的曝光之路都比较顺畅了。


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图一


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图二


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图三

编辑: 高薇

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