蛋白组学质谱分析中,样本前处理的酶切环节,直接决定蛋白鉴定数量、肽段覆盖度与数据重复性。漏切率高、酶批次差异、动物源病毒污染、非特异性切割,是很多小伙伴实验踩坑的重灾区。想要拿到稳定可信的质谱数据,选对质谱级工具酶是第一步。
今天为大家带来两款无动物源性质谱级重组蛋白酶:重组胰蛋白酶(质谱级)、重组赖氨酰内切酶Lys-C(质谱级),适配细胞、动物组织、IP免疫共沉淀样本,解决酶切不稳定、漏切偏高的痛点。
一、重组胰蛋白酶(质谱级)
产品简介
基因工程重组表达的丝氨酸蛋白水解酶,特异性识别并切割赖氨酸 (K)、精氨酸(R)的C-末端肽键,广泛用于蛋白组学蛋白酶解、肽段定位、蛋白序列研究,适配293T细胞、组织、IP样本等多种样本类型。
核心优势
无动物源性:毕赤酵母重组表达,全程无动物源原料,无外源病毒、致病物质污染风险。
高纯度高活性:HPLC纯度≥95%,比活高,宿主菌体蛋白、外源DNA残留严格控制在限度以内。
低漏切,数据更可靠:多批次样本验证,293T样本漏切率24.30%,大鼠肝脏样本漏切率22.80%,优于市面同类竞品。
批间稳定可控:规模化批量生产,质控严格,规避批次波动带来的实验重复差。
关键参数
来源 | 毕赤酵母 |
外观 | 白色、类白色冻干粉末 |
蛋白电泳 | 单一主条带 |
分子量 | 23.5±2.4 kDa |
纯度 | ≥95% |
酶比活性 | ≥3800 USP units / mg pro |
蛋白含量 | 40%-70% |
外源DNA残留量 | ≤100 ng / mg pro |
菌体蛋白残留量 | ≤100 ng / mg pro |
最佳pH | 7.0-9.0 |
溶解性 | 在水或缓冲液中可溶 |
推荐使用条件
酶:底物蛋白 = 1:50-1:20;1 μg胰酶可酶切2050 μg总蛋白,反应pH 7.0-9.0。
结果展示
Sample | 蛋白数 | 肽段数 | 漏切率 |
293T-EV | 7814 | 112498 | 24.3% |
293T-HLS | 7853 | 114950 | 29.9% |
293T-WIN | 7852 | 114803 | 38% |
Ratliver-EV | 6314 | 73584 | 22.8% |
Ratliver-HLS | 6564 | 76857 | 28.1% |
Ratliver-WIN | 6093 | 73558 | 36% |
订购信息
产品货号 | 产品名称 | 规格 |
EV01-01-01 | 重组胰蛋白酶(质谱级) | 100 μg |
EV01-01-02 | 重组胰蛋白酶(质谱级) | 100 μg×10 |
二、重组赖氨酰内切酶 Lys-C(质谱级)
产品简介
大肠杆菌重组表达的丝氨酸蛋白酶,与天然LysC活力、特异性保持一致;特异性切割赖氨酸残基、S氨乙基半胱氨酸残基羧基端肽键。
小提示:LysC酶切效率优于单胰酶,科研中常Lys-C+胰蛋白酶联用,实现分步消化,大幅提升难酶切蛋白、膜蛋白的肽段覆盖度,弥补单一胰酶酶切不充分的短板。适用于肽图谱分析、蛋白序列分析、蛋白组样本前处理。
核心优势
无动物源性:重组制备,无动物源原料,规避外源污染。
高特异性:无杂蛋白酶污染,几乎无非特异性切割,降低质谱背景干扰。
批间稳定性优异:全套严格质控,保障多批次实验结果可重复。
关键参数
来源 | 大肠杆菌 |
外观 | 白色、类白色冻干粉末 |
蛋白电泳 | 单一主条带 |
分子量 | 29.2±2.9 kDa |
纯度 | ≥95% |
酶比活性 | ≥2.5 AU / mg pro |
蛋白含量 | 30%-70% |
外源DNA残留量 | ≤100 ng / mg pro |
菌体蛋白残留量 | ≤100 ng / mg pro |
最佳pH | 8.5-9.5 |
溶解性 | 在缓冲液中溶解性良好 |
订购信息
产品货号 | 产品名称 | 规格 |
EV01-02-01 | 重组赖氨酰内切酶(质谱级) | 20 μg×5 |
EV01-02-02 | 重组赖氨酰内切酶(质谱级) | 20 μg×10 |
高频 FAQ,实验少走弯路
Q1:蛋白组前处理,该选胰酶还是Lys-C?
A1:胰酶切割K/R位点,是蛋白组最常用酶;Lys-C只切割赖氨酸位点,酶切效率更高。建议策略:Lys-C先酶切,再加入胰蛋白酶联合消化,改善蛋白消化充分度,提升蛋白鉴定数与序列覆盖度。
Q2:哪些物质会抑制酶活性?如何处理?
A2:体系避免TLCK、PMSF、盐酸胍等抑制剂;体系无机盐浓度>0.1 M会抑制酶活,优先脱盐再酶切;无法脱盐可提高酶用量,适当延长酶切时间。
小结
质谱级蛋白酶是蛋白组学的基础工具,动物源酶存在病毒污染风险,批次波动、漏切率高会直接影响课题数据质量。本系列两款重组酶,无动物源、高特异性、低漏切,既可单独使用,也可组合联用,适配细胞、组织、IP等各类质谱样本前处理,助力得到更稳定、更深度的蛋白组学结果。