PRV-805
伪狂犬病毒（PRV）广泛应用于示踪跨多个突触的神经环路。通过将 PRV 注射到外周部位，如心脏、胃肠道和肝脏，可以追踪到调控这些部位的大脑核团。此外，PRV 也可以直接注射在中枢神经系统，用来示踪多突触神经环路。然而，由于病毒感染多个不同的神经元，传统方法无法准确识别特定神经元的输入信息，特别是那些表达特定神经递质、神经肽或受体的神经元。
为解决这一挑战，Brain Case 推出了 PRV-805（PRV-△TK-DIO-mCherry），一款创新的逆行示踪病毒。PRV-805 仅在表达 Cre 重组酶的神经元和与起始细胞有突触连接的神经元中复制，并通过表达红色荧光蛋白标记这些神经元，精准示踪特异性神经元的输入。（点击了解详情）
图 1 PRV805 在 Vgat-cre 小鼠中的逆向标记效果图
内部测试数据显示：将 PRV805 注射在 Vgat-cre 小鼠的下丘脑，2 天后灌流取材，荧光成像结果显示注射位点及海马、杏仁核、内侧隔核、中缝背核、终纹床核等脑区有红色荧光信号（图 1）；而在 C57 鼠上则未检测到荧光信号，证明 PRV-805 实现了起始神经元特异性的逆向跨多突触示踪。这一创新技术将在神经科学研究中带来更精准的神经回路解析，助力探索复杂的脑部功能。
案例分享丨 PRV - 805
2001 年加州大学霍华德·休斯医学研究所 Jeffrey M. Friedman 团队在 Science（IF = 44.7）杂志上发表题为「Virus-Assisted Mapping of Neural Inputs to a Feeding Center in the Hypothalamus」的研究论文，研发了一种可用于逆行示踪特异性神经元的伪狂犬病毒 PRV-Ba2001，该病毒编码一种绿色荧光蛋白标记物，仅在表达 Cre 重组酶的神经元和与起始细胞有突触连接的神经元中复制。在 PRV 基因组中创建了一个双顺反子，其中 CMV 被克隆到 Tau-GFP 融合基因的上游，紧接着是一个内部核糖体进入位点（IRES），位于内源性胸苷激酶（TK）基因的 5' 端。在 CMV 启动子和 Tau-GFP 开放阅读框起始点之间插入一个 Lox-Stop-Lox 序列，两个 LoxP 位点之间包含一个 SV40 polyA 转录终止子，没有 Cre 重组酶的情况下，它会阻止下游序列的表达。因此，TK 和 GFP 的表达需要 Cre 重组酶介导。将病毒注射到神经肽 Y 神经元特异性 Cre 鼠（NPY-Cre 鼠）弓状核中，大脑切片显示这些神经元接收下丘脑、杏仁核、皮层和大脑其他区域的神经元的输入。
图 2 PRV-Ba2001 的结构和表达特性
2022 年 2 月 1 日，美国国立卫生研究院的 Sushil G. Rane 团队在 Cell Metabolism（IF = 27.7）杂志上发表了一篇题为「A distinct hypothalamus-to-b cell circuit modulates insulin secretion」的研究论文，开发了一款新的 Cre 依赖 PRV 病毒——PRV-Ba2017。与上一代 Cre 依赖的逆行示踪剂 Ba2001 相比，Ba2017 表现出更好的遗传稳定性和更高的表达效率。基因编码序列包含 CAG 启动子，LoxP 位点，SV40 polyA 转录终止子，Lox2272 位点，倒置的 TK 序列，倒置的绿色荧光蛋白 EGFP 序列，倒置的 LoxP 和 Lox2722 位点，WPRE 转录后调节序列和 BGH polyA 转录终止子。为了减少在没有 Cre 酶的情况下泄漏表达，作者利用了 DIO/FLEX 系统，引入两对不同的 Lox 位点（LoxP 和 Lox2272）。将 Ba2017 注射到胰腺 β 细胞特异性 Cre 鼠（Ins1-Cre 鼠）的胰管中，结果显示在胰腺外分泌部、脊髓、脑干和 PVN 细胞可以检测到绿色荧光信号。
图 3 用 PRV-Ba2017 感染 Ins1-Cre 鼠的胰岛 β 细胞
客户使用反馈丨 PRV - 805（点击了解详情）
1、某客户成功在 Cre 转基因鼠的脊髓中注射 PRV-805，示踪效果清晰可见，展示了 PRV-805 在中枢神经系统中的高效示踪能力（图 4）。
图 4 Cre 转基因鼠脊髓注射 PRV805 示踪效果图
2、某客户在 Cre 转基因鼠的舌部注射 PRV-805，成像结果显示 PRV-805 在周围神经系统中表现出良好的示踪效果，进一步验证了其广泛的应用潜力（图 5）。
图 5 Cre 转基因鼠舌部注射 PRV805 示踪效果图
3、某客户在 Cre 转基因鼠的关节腔注射 1.5-2.5μL PRV-805，表达时间为 6 天和 7 天，但成像结果显示中枢神经系统未检测到示踪信号。具体原因尚不明确，可能与注射部位、剂量或表达时间有关，可以进一步优化实验条件。
总结
PRV-805 在脊髓和舌部注射中表现出优异的 Cre 依赖逆向跨多突触标记效果，但在关节腔注射中可能存在一定的局限性，建议根据具体实验需求调整注射方案。
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关于布林凯斯
布林凯斯（Brain Case）是一家专注于工具病毒载体研究及转化医学研究的高新技术企业。在过去的十多年时间里，以揭秘「大脑黑匣子」为己任，一直致力于工具病毒载体开发及应用策略研究，在神经环路示踪工具病毒载体（RV、PRV、HSV、VSV、CAV 等）、疾病基因治疗用重组腺相关病毒（rAAV）载体研究、肿瘤免疫治疗用溶瘤病毒等研究积累丰富经验，发展了行业前沿的制备系统。
布林凯斯（Brain Case）现有 80+人的研发及技术团队，硕博研究生率超 45%，拥有 20 多项自主知识产权，已建成全流程的 GMP 生产及实验平台，在深圳、武汉和苏州建有完善的技术平台。公司开展基于神经环路研究、递送载体技术的基础科研及药物研发服务。