封闭液(Blocking solution)是生物化学和分子生物学实验中常用的一种试剂,主要用于免疫学检测技术,如酶联免疫吸附测定(ELISA)、Western blot 和免疫组化(IHC)等实验中。这一步骤虽然小巧,但很重要。最近隔壁实验室就出现了因封闭液选错而造成的大乌龙!实验室大师姐养了两年的小鼠提取蛋白,全部作废。
Outblock 可以显著提高 ELISA 分析方法的信噪比,相比于进口 super 超级封闭液,对于封闭糖基化包被抗原,降低人血样本的本底,提高临床生物分析的特异性,具有碾压性优势。
常见封闭剂有哪些?Outblock 有何优势?
一般来说,为了确保实验的准确性和可重复性,通常会选择成分更简单、更纯净的封闭液,如 BSA 或其他商业化、成熟的封闭液,这些封闭液被特别设计用于减少非特异性结合,提高实验的特异性和灵敏度。常见封闭剂以及它们的性能对比如下:
表 1. 常见封闭剂性能对比
而 ELISA 实验的准确性和重复性一直是研究者追求的目标。然而,传统的封闭液,如牛奶,由于其成分复杂,常会引起非特异性反应,影响实验结果的准确性;BSA 应用广泛,也不是最合适的封闭剂,待测样本中的杂质或后续的酶标结合物容易非特异性吸附到板子上去,本底不降反升,信噪比降低,使得 ELISA 分析方法的功效率严重降低。
为了克服以上难题,北京新艾进生物科技有限公司的专家团队经过多年的研究和实践,开发出了一种新型的封闭剂蛋白——Outblock 封闭液,能够显著降低 ELISA 后续过程中的非特异性吸附,从而提高检测信号的信噪比,增强检测的灵敏度。
一起来看看 ta 的数据如何?
1、糖基化 PD1 蛋白包被板子,检测人血中抗 PD1 单抗,detection 为羊抗人-HRP
抗 PD1 单抗的 PK 临床生物分析, 包被糖基化的 PD1 抗原蛋白, detection 为羊抗人 IgG-HRP,由于人血清中正常 IgG 的干扰,容易出现低值假阳性,用 outblock 封闭, 高效消除正常 IgG 的干扰。
表 2. 1%BSA PBST、superblock、outblock 数据对比(MRD 1:20)
研究发现,所有操作步骤一致的情况下 Outblock 信噪比显著高于 1%BSA PBST 和 superblock,明显提升临床生物分析的特异性和灵敏度。
2、 糖基化 vegf 蛋白包被板子,检测人血中抗 vegf 单抗,detection 为羊抗人-HRP
抗 VEGF 单抗的 PK 临床生物分析, 包被糖基化的 VEGF 抗原蛋白,detection 为羊抗人 IgG-HRP,由于人血清中正常 IgG 的干扰,容易出现低值假阳性,用 outblock 封闭, 消除正常 IgG 的干扰。
表 3. 抗 VEGF 单抗临床 PK 分析,superblock AND outblock 数据对比(MRD 1:20)
由此可见,所有操作步骤一致的情况下,Outblock 信噪比显著高于 super 封闭剂。
3、鼠抗 nanoAb 包被,检测猴血中 nanoAb,detection 为生物素化鼠抗 nanoAb,SA-HRP+TMB 指示信号
表 4. 纳米抗体临床前 PK 分析, super 封闭剂和 outblock 数据对比(MRD 1:20)
研究发现,猴血样本纳米抗体 PK 分析时, Outblock 与 superblock 无显著差异,但 outblock 具有成本优势。
4、 鼠抗 A01 激素 MAb 包被,检测肌肉组织提取液中 A01,detection 为生物素化鼠抗 A01 MAb,SA-HRP+TMB 指示信号
表 5. 某激素药临床前 PK 分析,肌肉样本,MRD 1:10
对于肌肉组织样本,Outblock 比 superblock 本底显著降低,分析灵敏度显著提升。
5、B020 蛋白药 PK 分析,在 MSD 平台上对比 outblock 和 super 封闭液
表 6. MSD 平台上对比 super 封闭液和 outblock 封闭液
在 MSD 平台上, 某蛋白药 PK 分析,两种封闭液信号无显著差异。
6、封闭时间对比
包被糖基化的 EGFR 抗原蛋白,检测人血中抗 EGFR 单抗,detection 为羊抗人 IgG-HRP,考查 outblock 不同封闭时间的效果,super 封闭液作对照
表 7. outblock 不同封闭时间结果对比
outblock 室温封闭 15 分钟, 即可有效去除正常人 IgG 的非特异性吸附干扰。
综上所述,Outblock 封闭液以其高效、特异性强、成本效益高等特点,在 ELISA 实验中展现出了卓越的性能。它的出现,不仅为研究者提供了一种新型的选择,更为提高 ELISA 实验的准确性和重复性提供了有力支持。
随着 Outblock 封闭液的进一步应用和推广,我们有理由相信,它将在生物分析领域发挥越来越重要的作用。