产前/胚胎神经元细胞的培养

2025-04-30 14:25 来源:丁香园 作者:
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操作说明(仅供参考):

准备培养基

(1)每 100 ml Neuronal 培养基添加 2 ml B-27 添加剂(50X),并加入终浓度 0.5 mM 的 L-谷氨酰胺(Glutamine)或 L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液;或者每 100 ml Neuronal 培养基添加 1 ml N-2 添加剂(100X),并加入终浓度 0.5~2 mM 的 L-谷氨酰胺或 L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液

(2)原代神经元细胞首次接种平板时,应先加入 25 µM(3.7 μg/ml)L-谷氨酸。有些细胞系需要加入终浓度 2% 的血清促进细胞贴壁

(3)可加入 25 µM β-巯基乙醇以延长海马神经元的存活时间

注意:培养基准备完全后,请避光保存在 2~8 ℃ 的环境里,并于一周内使用完毕。


细胞培养的条件

培养基:Neuronal 培养基细胞类型:贴壁细胞;培养容器和设备:培养板,培养瓶和 CO2 恒温培养箱;培养温度:36~38 ℃;培养条件:CO2 含量 5% 的湿润空气,避光。实验前应对细胞培养仪器进行温度和空气的设置。

以下实验方案,均以 6 孔培养板为例。


神经细胞培养

原代神经元细胞的培养在神经生物学和药理学中都是必不可少的。科学家钟爱使用新分离的神经元细胞,因为它们保留着良好的功能性,但是考虑到获取不便,使用商品化的大鼠原代神经元细胞更具有灵活性,能够立即使用,同时其功能性等同于新分离的神经元细胞。而特定原代神经元细胞类型的获取,非常依赖操作者优化的实验方案。


培养板培养细胞

在 48 孔培养板或者其它培养器皿上包被冷的多聚 D-赖氨酸溶液 (0.05 mg/ml)。用于原代神经元细胞培养时,包被量 0.15 ml/cm2,室温下 1 小时;

移去包被液,并用无菌水冲洗两次(包被液有细胞毒性,请冲洗彻底);

勿覆盖冲洗后的培养板,保证空中水分完全干燥。干燥后可立刻使用,或者可在 4 ℃ 的干燥环境中保存两周;

接种细胞入培养板,每 60~150 μl Neuronal 和添加剂的混和培养基,接入 90~320 个/mm2 的细胞;

放入培养箱培养一小时;

倾斜培养板,将培养基轻轻吸出;

在孔中迅速加入 0.4 ml/孔预热的 Neuronal 和添加剂的混和培养基;

接种细胞后 3~4 天,首次更换培养基,以后每隔 3 天更换一次培养基;

更换时,吸出一半旧培养基,加入等量新培养基。

注意:培养成神经细胞瘤时,接种和替换的培养基中需要含 L-谷氨酰胺溶液。


复苏:

低温储藏复苏后的原代神经元细胞非常脆弱,请勿离心收集细胞!神经元细胞可以附着在塑料或者玻璃表面。为了更好地复苏细胞,我们推荐在使用之前,请用培养基预冲洗所有塑料和玻璃表面。

  • 实验前请准备好多聚 D-赖氨酸溶液包被的无菌培养器皿;

  • 在 37 ℃ 水浴中,迅速(<1 分钟)溶解一小管冻存的细胞。最后一丝冰融化时,立刻从水浴中移出管子;

  • 在完全培养基中冲洗移液器尖端,然后轻轻的吸取小管中溶解的细胞,并转移至预先用培养基冲洗过的 15 ml 圆锥管中;

  • 用 1 ml 预热的培养基冲洗小管,然后用每秒钟 2 滴的速度滴到 15 ml 圆锥管中,每滴后轻摇混匀;

  • 逐滴加入 2 ml 培养基,每滴后轻摇混匀,使管内悬液体积达到 4 ml;

  • 细胞计数;

  • 在多聚 D-赖氨酸溶液包被过 48 孔板(或者 8 腔室盖玻片)的每个孔 (或者腔室) 中加入约 1×105 个细胞,并用培养基补充终体积至 500 μl;

  • 放入培养箱培养;

  • 接种细胞后每隔 3 天更换一次培养基;更换时,吸出一半旧培养基,加入等量无 L-谷氨酰胺的新培养基。


产品简介,点击咨询详情:

Neuronal 培养基用于出产前/胚胎神经元细胞的培养,使用时需添加 KEL Biotech B-27 或 N-2 添加剂。可应用于海马神经元,大脑皮层和大脑其他区域的神经细胞的培养。该培养基可以在不添加胶质细胞饲养层的情况下,短期或长期维持神经细胞的同源群落存活。Neuronal 基础培养基不含 L-谷氨酰胺(Glutamine)、L-谷氨酸和 L-天冬氨酸,必须组合无血清添加剂 (例如 B-27 或 N-2 添加剂),或者血清和 0.5 mM L-谷氨酰胺,再或者血清和 0.5 mM L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液。初次接种平板时,应加入 25 µM L-谷氨酸。

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注意事项:

本产品使用注射用水配置。

本产品供科学研究和生产使用,用于组织和细胞的体外培养。禁止临床使用。

产品参数:

本产品为过滤除菌产品。物理外观:红色澄清液体;内毒素:≤ 0.25 EU/ml;渗透压:205~245 mOsm/kg·H20;pH 值:7.1~7.5;储藏条件:2~8 ℃,避光;运输条件:蓝冰;用途:仅供科研和生产使用

编辑: 朱卿

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