产品介绍
磁珠法DNA凝胶快速回收试剂盒是一种利用新型核酸纯化介质——包被的磁珠，从DNA琼脂糖凝胶中稳定、高效、便捷地回收目的DNA的试剂盒。适用于PCR产物、质粒DNA酶切片段、超螺旋质粒DNA单酶切后的线性化产物或DNA连接产物等在琼脂糖凝胶电泳后切胶产物的回收。回收得到的DNA可直接用于酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。
操作方法
手工提取
- 切胶回收：称量切胶后的凝胶，将其切碎或在离心管内用1ml枪头捣碎。
- 加入融胶液：按胶重加入等体积的融胶液，涡旋或颠倒混匀。
- 融胶：50-60ºC水浴加热约10分钟至胶全融，期间轻微涡旋或颠倒混匀3-4次。胶碎片较小的3-5分钟即可全融，较大的需较长时间。胶全融后至少再加热2分钟。若DNA片段大于5kb，宜颠倒混匀，避免涡旋导致大片段DNA断裂。
- 加入磁珠悬液：加入30微升磁珠悬液（使用前务必混匀），涡旋混匀，室温放置3-5分钟。将离心管置于磁力架中，待磁珠完全聚集后，小心吸除残液。
- 洗涤：
- 取下离心管，加入700μL洗涤液一，盖上管盖，涡旋10-30秒，上磁力架吸磁30秒，打开管盖去除废液。
- 取下离心管，加入700μL洗涤液二，盖上管盖，涡旋10-30秒，上磁力架吸磁30秒，打开管盖去除废液。
- 去除残留液体：瞬离，上磁力架，去除管底残留液体，室温静置3分钟。
- 洗脱DNA：加入20-100μL洗脱液，盖上管盖，充分涡旋混匀10-30秒，75℃孵育2-5分钟，上磁力架吸磁1分钟，取上清转移到新的离心管中，用于下游检测。如不马上使用，建议-20℃保存。
上机提取
- 检查预分装板：使用前检查预分装板是否有漏液破损等现象，如有则禁止使用。
- 准备试剂：将试剂平放于桌面，撕封口膜时避免振动，防止液体溅出。在孔板孔位1中加入样本，将孔板放入核酸提取仪中，装上磁棒套，确认磁棒套安装到位，注意交叉污染。
- 加样：按照表2在96孔板中加样。
- 运行程序：按照表3运行程序。
表2 试剂组成成分
| 试剂名称 | 孔位 | 体积 |
|---|---|---|
| 融胶液 | 1/7 | 100-500μL |
| 磁珠悬浮液 | 2/8 | 400μL(370μL磁珠保存液+30μL磁珠原液) |
| 洗涤液1 | 3/9 | 700μL |
| 洗涤液2 | 4/10 | 700μL |
| 洗脱液 | 6/12 | 50μL |
表3 上机程序
| 步骤 | 孔位 | 混合时间 | 磁吸时间 | 等待时间 | 体积 | 混合速度 | 温度 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 10min | 1min | 0 | 500μL | 中 | 55℃ |
| 2 | 1 | 3min | 1min | 0 | 600μL | 中 | 56℃ |
| 3 | 3 | 1min | 1min | 0 | 700μL | 快 | 0 |
| 4 | 4 | 1min | 1min | 2min | 700μL | 快 | 0 |
| 5 | 6 | 3min | 2min | 0 | 50μL | 快 | 75℃ |
| 6 | 2 | 30s | 0 | 0 | 400μL | 快 | 0 |
特点
- 操作便捷：手工提取步骤简单，无需复杂仪器设备；上机提取适合高通量样品处理，可配合核酸提取仪进行自动化操作。
- 纯化效果好：磁珠对DNA有特异性结合能力，在磁场作用下能快速分离，有效去除杂质，如蛋白质、多糖、酚等，洗脱效率高，保证DNA的回收率和纯度。
- 适用范围广：适用于多种DNA样品类型和下游实验需求。
- 保存条件宽松：试剂盒在常温下保存即可，有效期24个月，方便储存和运输。
优点
- 快速高效：整个提取过程时间较短，能快速获得纯化的DNA样品，提高实验效率。
- 特异性结合：磁珠对DNA有特异性结合能力，在磁场作用下能快速分离，减少杂质的干扰。
- 洗脱效率高：洗脱液与磁珠的结合力强，能保证DNA的回收率。
应用
- 科研领域：适用于分子生物学、遗传学、微生物学等领域的DNA回收和纯化，如基因克隆、基因编辑、基因表达分析等。
- 下游实验：回收的DNA可直接用于酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。
产品链接：https://www.biomart.cn/infosupply/113251351.htm