一、客户预约与上门建库
欧易生物向客户提供 10× genomics 上门建库服务，提前两周进行预约即可，老师需尽量自备以下仪器和耗材：
二、样品要求和样品准备原则
1. 样品要求
（1）样品总量：细胞悬浮液，一个样品细胞起始量大于 1×105个；
（2）样品浓度：5×105- 1.2×106/ mL，最低需要 1×105/ mL；
（3）细胞活性：细胞活率在 90 % 以上；
（4）细胞大小：直径小于 40 μm；
（5）细胞培养基及缓冲液不能含有 Ca2+ 和 Mg2+等影响酶活性的物质；
（6）组织需解离成单细胞悬液，植物细胞需制成原生质体。
2. 样品准备原则
（1）建议使用宽口枪头重悬，以减少对细胞的损伤；
（2）每次移液前先混匀细胞悬液，然后从管中部吸取；
（3）所有环节最好在无菌环节下操作、使用无核酸酶的试剂、减少移液步骤；
（4）取样时最好设置两个重复，对每个样品计数 2 次；
（5）弃上清时注意不要破坏细胞沉淀；
（6）某些细胞如 hPBMCs 在 PBS 中易成团状，从而降低细胞的有效浓度，因此制备细胞悬液要迅速，最好在 30 分钟内完成；
（7）最佳上样体积为 2.5 μL～15 μL，建议上样前根据需要上样的细胞数调整单细胞悬液浓度；
（8）对于直径较大的细胞如永生化细胞株建议室温下 150 rcf 离心 3 min，对于直径较小的细胞如 PBMCs 建议室温下 300 rcf 离心 5 min；
（9）重悬细胞浓度建议不要超过 5000 cells/ μL，最理想的范围保持在 700-1200 cells/ μL，此浓度下计数较为准确；
（10）一般选用含 0.04 % BSA（400 μg/mL）的 1×PBS 溶液重悬细胞。
三、样品制备方法
目前 10× genomics 样品的制备没有一个金标准，即很难找到一个可以适用于所有样品的制备方法。根据官方推荐和文献参考，结合公司在样品制备方面的技术经验，我们总结出以下不同类型样品制备单细胞悬液的方法：
（1）组织样品需要通过酶促解离的方法制成单细胞悬液，我们提供了多种类型组织的解离方案；
（2）细胞数量较少（小于 100,000）的样品可适当减少洗涤次数；
（3）细胞直径过大的样品，可以分离细胞核，制备细胞核悬液；
（4）植物细胞须要去除细胞壁得到原生质体的悬液，我们提供了苔藓样品的制备方案供老师参考。
详细的样品制备方法和步骤详见上海欧易生物推出的《10× genomics 单细胞测序样品准备指南》（目录如下图所示），若有需要的老师可向当地负责人联系。
